家蚕,家蚕非编码RNA在丝腺表达-turnitin论文查重

：非编码RNA (non-coding RNA,ncRNA)是一类不编码蛋白质但有功能的RNA的总称,它们几乎有着于生物体内,在生命活动中发挥着的调控作用,如参与蛋白质合成、染色体复制、RNA的转录及转录后加工、mRNA的稳定和翻译、蛋白质的降解与转运等。家蚕是探讨鳞翅目昆虫发育及生理学特点的方式生物,做为经济昆虫它还有的经济价值,其丝腺是典型的外分泌腺体,它是合成、分泌丝蛋白的特殊器官,并且具有强大地合成和分泌丝蛋白的能力。长期以来,丝腺家蚕探讨的热点,尤其在2004年家蚕基因组测序计划完成后,在丝腺发育的分子机制了很大的进展。对家蚕丝腺的探讨在编码基因,而在非编码上的探讨却鲜有报道。在本实验室前期构建家蚕50-500nt的非编码文库的上,对家蚕不同发育阶段有表达差别的40个ncRNA做探讨,Northern杂交浅析40个ncRNA在家蚕五龄幼虫不同部位的表达谱,以期筛选到在丝腺特异表达的ncRNA,并对其功能探讨,旨在探讨ncRNA对丝腺发育的调控机理。结果如下:1.Northern杂交的策略探讨前期筛选到的40个在家蚕不同发育阶段教育论文表达差别的ncRNA在五龄幼虫头、胸、尾、背板、腹板、丝腺的表达情况,6个在丝腺高丰度表达的ncRNA:Bm-18、Bm-51、Bm-86、Bm-101、Bm-152、Bm-159。2.选取丝腺表达丰度较高的ncRNA,对其宿主基因及上下游基因在家蚕五龄幼虫头、胸、尾、背板、腹板、丝腺的表达情况探讨,内含子起源的snoRNA Bm-86与其宿主基因BGIBMGA007469-TA在丝腺的表达呈负的联系,另外unclassified ncRNA Bm-152与其互补链上的基因BGIBMGA007380-TA在丝腺的表达也呈负的联系,这些ncRNA可能调控其宿主基因或互补链上基因的表达来参与丝腺的发育调控。3.RT-PCR浅析丝腺高丰度表达的ncRNA在丝腺的分布情况,在前、中、后丝腺中,Bm18、Bm51、Bm-86、Bm-101、Bm-152、Bm-159都有表达,Bm-51和Bm-152在丝腺三部位的表达量无太大变化;Bm-86和Bm-159在前部丝腺和后部丝腺的表达量较多于中部丝腺;Bm-18、Bm-101在前部丝腺表达量较多。4.浅析丝腺高丰度表达的ncRNA在丝腺细胞核、质的表达情况,snoRNA Bm-51在细胞质里的表达量稍多于细胞核,Bm-51除了在细胞核中发挥功能,在细胞质中也可能也发挥的调控功能;而unclassified ncRNA Bm-152和Bm-159在核质都有表达且表达量无太大差别。词：家蚕非编码RNA丝腺Northern杂交表达谱
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致谢4-5
目录5-7
7-8
1 文献综述8-21
1.1 非编码RNA 的分类和作用8-16
1.1.1 小于 50nt 的非编码 RNA8-10
1.1.1.1 microRNA8-9
1.1.1.2 siRNA9-10
1.1.1.3 piRNA10
1.1.2 50nt 到 500nt 大小的中等 ncRNA10-15
1.1.2.1 小分子核RNA（snRNA）10-11
1.1.2.2 小胞浆RNA（scRNA）11
1.1.2.3 核仁小分子RNA（snoRNA）11-15
1.1.3 大于 500nt 的长链非编码 RNA15-16
1.2 非编码RNA 探讨技术16-18
1.2.1 生物信息学策略预测新ncRNA16
1.2.2 ncRNA 的测序鉴定16-17
1.2.2.1 测序16
1.2.2.2 cDNA 文库测序16-17
1.2.3 生物芯片浅析17
1.2.4 基因组SELEX 技术17-18
1.2.5 功能性的RNA 组学策略18
1.3 昆虫非编码RNA 的探讨进展18-19
1.4 家蚕丝腺探讨进展19-21
1.4.1 家蚕丝腺结构和生理功能19-20
1.4.2 家蚕丝腺基因探讨进展20-21
2 21-22
2.1 探讨目的和作用21
2.2 探讨内容21-22
3 和策略22-33
3.1 实验器材与试剂22-24
3.1.1 实验22
3.1.2 实验仪器22
3.1.3 实验试剂及溶液配制22-24
3.1.3.1 药品与试剂22-23
3.1.3.2 试剂配制23-24
3.2 实验策略24-33
3.2.1 引物设计24-25
3.2.2 家蚕组织中总RNA 的提取25
3.2.3 RNA 的纯化25-26
3.2.4 变性PAGE 电泳检测RNA26
3.2.5 探针的合成26-28
3.2.5.1 质粒的提取26-27
3.2.5.2 质粒载体线性化27
3.2.5.3 酶切产物纯化回收27-28
3.2.5.4 体外转录合成探针28
3.2.6 Northern 杂交28-29
3.2.6.1 RNA 样品的变性PAGE 电泳28
3.2.6.2 转膜28
3.2.6.3 RNA 的紫外交联28-29
3.2.6.4 预杂交29
3.2.6.5 杂交29
3.2.6.6 洗膜29
3.2.6.7 压片、29
3.2.7 宿主基因的RT-PCR29-30
3.2.7.1 cDNA 条链的合成29-30
3.2.7.2 PCR 反应30
3.2.8 非编码RNA 的RT-PCR30-32
3.2.8.1 RNA 去磷酸化30
3.2.8.2 去磷酸化产物的trizol 纯化30-31
3.2.8.3 RNA 的3’加接头的策略31
3.2.8.4 反转录和cDNA 合成31-32
3.2.9 DNA 琼脂糖胶电泳32
3.2.10 丝腺细胞核、质 RNA 的分离32-33
4 结果与浅析33-42
4.1 Northern 浅析ncRNA 在家蚕组织的差别33-35
4.1.1 家蚕不同组织部位总RNA 的提取及定量33
4.1.2 Northern 探针的制备及质量检测33-35
4.1.3 丝腺高丰度表达非编码RNA 的筛选35
4.2 丝腺高丰度表达的ncRNA 在前、中，后丝腺的分布情况35-38
4.3 丝腺高丰度表达的ncRNA 与宿主基因之间的联系38-39
4.4 丝腺高丰度表达的ncRNA 在丝腺细胞核、质的表达浅析39-42
5 结果与讨论42-45
5.1 结果42
5.2 讨论42-45
5.2.1 丝腺高丰度表达ncRNA 的筛选43-44
5.2.2 丝腺高丰度表达ncRNA 在丝腺分布44-45
文献45-51
Abstract51-53
攻读硕士学位期间发表论文53

家蚕,家蚕非编码RNA在丝腺表达

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